NanoDrop One 超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室快速檢測核酸、蛋白等樣品濃度與純度的核心設(shè)備,其檢測精度高、樣品用量少,做好樣品檢測的細(xì)節(jié)把控,能有效避免數(shù)據(jù)偏差、保障檢測結(jié)果可靠,以下是關(guān)鍵注意事項(xiàng):
樣品預(yù)處理與用量把控
檢測前需確保樣品無雜質(zhì)、無氣泡,若樣品中存在顆粒物、纖維等雜質(zhì),需先通過離心(12000rpm,5-10min)或 0.22μm 濾膜過濾處理,防止雜質(zhì)附著檢測探頭影響吸光度讀數(shù);同時(shí)要避免樣品中混入氣泡,否則會造成數(shù)據(jù)波動(dòng)或無效讀數(shù)。該設(shè)備僅需 0.5-2μL 樣品即可檢測,取樣時(shí)需用移液槍精準(zhǔn)控制體積,不可過量(過量易溢出污染探頭),也不可不足(不足無法形成完整液柱,導(dǎo)致檢測失敗);且移液槍槍頭需無殘留、無污染,建議一次性使用,防止交叉污染。
檢測探頭清潔與維護(hù)
檢測探頭的潔凈度直接決定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,每次檢測前后需用去離子水或適配的溶劑(如檢測蛋白用緩沖液、檢測有機(jī)溶劑樣品用無水乙醇)擦拭探頭表面,去除殘留樣品;若樣品黏性較大(如含高濃度甘油的樣品),需用無塵棉簽蘸取對應(yīng)溶劑輕輕擦拭,再用去離子水清潔,最后用無塵紙吸干水分,嚴(yán)禁刮擦探頭光學(xué)表面。若探頭出現(xiàn)頑固污漬,可使用設(shè)備專用清潔液處理,不可用強(qiáng)酸強(qiáng)堿或粗糙工具清潔,避免損傷光學(xué)元件。
檢測環(huán)境與參數(shù)設(shè)置
設(shè)備需放置在穩(wěn)定、無強(qiáng)光直射的環(huán)境中,檢測時(shí)環(huán)境溫度需控制在 15-30℃,避免溫度劇烈波動(dòng)影響檢測精度;同時(shí)要保持設(shè)備水平放置,防止樣品液柱因設(shè)備傾斜出現(xiàn)形態(tài)異常。檢測前需根據(jù)樣品類型正確設(shè)置參數(shù),比如檢測 dsDNA 選擇 A260/A280 模式、檢測蛋白選擇 A280 模式,還要確認(rèn)基線校準(zhǔn)完成,若基線波動(dòng)超出允許范圍,需重新校準(zhǔn)后再進(jìn)行檢測;對于特殊樣品(如低濃度核酸、帶熒光標(biāo)記的樣品),需選擇對應(yīng)檢測程序,不可用通用模式強(qiáng)行檢測。
樣品回收與后續(xù)清理
若樣品需回收,需在檢測完成后立即用潔凈移液槍將樣品從探頭處吸回至原管,操作時(shí)要避免接觸探頭造成二次污染,且回收的樣品需做好標(biāo)識,不可與未檢測樣品混淆。無需回收的樣品,需用去離子水徹底清潔探頭和周邊臺面,防止樣品殘留滋生細(xì)菌或腐蝕設(shè)備;檢測結(jié)束后,需關(guān)閉設(shè)備檢測艙蓋,定期清理設(shè)備外殼灰塵,同時(shí)做好檢測數(shù)據(jù)的備份與記錄,便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)追溯。