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結合科譽興業(yè)BioSpaceX-3D的設備特性,可通過設備功能調(diào)控、實驗方案優(yōu)化雙維度實現(xiàn)微重力下細胞團聚的高效分散,具體方法如下:
1. 利用設備專屬參數(shù)調(diào)節(jié)
借助儀器的45°傾斜旋轉功能,將轉速精準調(diào)控至5-20rpm區(qū)間,通過整機三維旋轉產(chǎn)生的溫和流體剪切力,打破初期細胞簇并維持單細胞/小聚集體懸浮狀態(tài);同時可利用其精準重力模擬能力,微調(diào)重力場至適配區(qū)間(如10?2g-0.1g),減少重力沉降導致的細胞抱團,且該轉速與重力調(diào)節(jié)不會產(chǎn)生高剪切力損傷細胞。
2. 配套實驗流程優(yōu)化
- 接種前預處理:用胰酶+0.02%EDTA混合液輕柔消化細胞團,制備單細胞懸液,若為難分散細胞可搭配低密度傳代預培養(yǎng);同時利用儀器可放入CO?培養(yǎng)箱的特性,全程維持37℃、5%CO?的穩(wěn)定環(huán)境,避免細胞應激性團聚。
- 培養(yǎng)基定制適配:在培養(yǎng)基中添加0.1%-0.5%甲基纖維素等抗團聚劑,結合設備耗材可定制的優(yōu)勢,選用防粘附夾具/培養(yǎng)皿,降低細胞與容器、細胞間的粘連;若存在DNA介導的細胞聚集,可在培養(yǎng)基中加入低濃度DNA酶I(需控制用量避免細胞突變)。
- 實時監(jiān)測與動態(tài)調(diào)整:通過設備WIFI互聯(lián)的實時重力監(jiān)測功能,同步觀察培養(yǎng)體系內(nèi)重力數(shù)值變化,若發(fā)現(xiàn)團聚趨勢可及時微調(diào)旋轉轉速或重力參數(shù),同時定期更換1/3培養(yǎng)基清除代謝廢物,從環(huán)境層面抑制細胞聚集。
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